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CRISPR技术基因矫正乙型血友病来源iPS细胞的致病点突变并诱导肝系分化

何琼, 王惠荟, 程涛, 袁卫平, 马钰波, 蒋永平, 任志华

2017, 32(3): 135-144. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.032

Abstract：目的 通过CRISPR/Cas9技术矫正乙型血友病病人诱导多能干细胞（iPSCs）的点突变基因缺陷，进一步证明CRISPR/Cas9技术用于遗传性疾病基因矫正的有效性，并为乙型血友病的基因细胞疗法提供参考依据。方法 首先，提取乙型血友病病人来源iPSCs基因组DNA，扩增凝血因子IX的8个外显子区域，并测序。其次，根据测序结果设计4条sgRNA，构建CRISPR/sgRNA质粒，并在293T细胞上进行剪切能力验证，挑选出一条具有较高剪切效率的sgRNA。同时根据突变位点设计129个核苷酸的含两个同义突变位点的单长链寡聚核苷酸 (ssODN)，作为同源修复模板。再次，通过电击转染的方式将CRISPR/sgRNA质粒和ssODN导入iPS细胞内，低密度种板，嘌呤霉素筛选48 h，再培养5～7 d。然后，挑取55个单克隆，PCR扩增目标序列并直接测序筛选矫正克隆。通过在线软件，选择8个具有较高脱靶风险的位点，分别进行脱靶效应分析。最后，将矫正克隆在体外分化成肝脏细胞，用免疫荧光和酶联免疫法检测凝血因子IX的表达。结果 PCR测序结果显示该样本为6号外显子的点突变样本(c.676 C>T)。通过CRISPR/Cas9技术，成功测序45个克隆，筛选到了10个按照同源模板发生精确矫正的克隆，矫正效率达到了22% (10/45)，并且未发现脱靶效应。最后我们对矫正克隆进行了为期21 d的肝细胞分化，ELISA结果显示，在分化末期凝血因子IX的表达可以达到6 ng/ml。结论 采用CRISPR/Cas9系统和长度为129个核苷酸的含两个同义突变的单链寡聚核苷酸，成功矫正了原乙型血友病iPS细胞株的致病点突变。这种人类乙型血友病的原位基因矫正方法为乙型血友病的基因细胞疗法提供了新的可能性。  

Keywords：乙型血友病;诱导多能干细胞;CRISPR/Cas9;基因矫正;肝系分化   

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Updated：2024-04-10

肾小球皮质密度对随访5年的IgA肾病不良预后的预测^△

陈振杰, 李航, 蔡建芳, 张鑫, 李超, 邹佩美, 李明喜, 陈丽萌, 李雪梅, 李学旺, 文煜冰

2017, 32(3): 145-151. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.021

Abstract：目的 评估肾小球皮质密度（glomerular density, GD）是否可以作为估测肾小球滤过率（estimated glomerular filtration rate，eGFR）在30到60 ml/(min·1.73 m2)的IgA肾病患者以及随访中时间平均蛋白尿< 0.5 g/d患者预后不良的独立危险因素。方法 入组2000年1月至2010年12月在本院经肾脏穿刺诊断为IgA肾病、且随访时间大于5年的173例患者。主要终点事件为随访5年后eGFR较基线值下降大于30%。采用ROC曲线计算GD的诊断界值，采用Kaplan-Meier生存分析及Cox回归分析评估预后。结果 随访期间14.5%的患者eGFR下降超过30%。GD对于IgA肾病预后的诊断界值为1.99/mm2（ROC下曲线面积=0.90, 敏感性=84.0%，特异性=81.8%）。对于eGFR在30到60 ml/(min·1.73 m2)的IgA肾病患者，更多的低GD患者（GD<1.99 / mm2）发生终点事件（低GD组6例，高GD组1例）。对于时间平均蛋白尿< 0.5 g/d的患者, 低GD 组的eGFR下降更显著[4.5±16.7 ml/(min·1.73 m2) 与 -8.1±21.4 ml/(min·1.73 m2), P = 0.038]；低GD组中2例患者随访中出现终点事件，而高GD组无终点事件发生。结论 GD是eGFR在30到60 ml/(min·1.73 m2)及随访中时间平均蛋白尿<0.5 g/d的IgA肾病患者的独立危险因素。  

Keywords：肾小球皮质密度;IgA肾病;肾脏预后   

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Updated：2024-04-10

构建预测陕西省咸阳市日本脑炎疫情的季节性时间序列模型

张荣强, 李凤英, 刘军礼, 刘美宁, 罗文瑞, 马婷, 马波, 张志刚

2017, 32(3): 152-160. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.036

Abstract：目的 通过构建季节性时间序列模型（SARIMA），预测陕西省咸阳市日本脑炎疫情，为日本脑炎的预防控制提供参考。方法 采用理论流行病学研究设计，收集2005年1月至2014年9月陕西省咸阳市日本脑炎的发病率资料，采用Box和Jenkins方法建立最佳的SARIMA模型，并对咸阳市日本脑炎的发病率进行短期预测。结果 研究结果显示：SARIMA（1, 1, 1）（2, 1, 1）12是最佳模型，该模型具有最低的贝叶斯信息标准（BIC），Akaike信息标准（AIC），平均绝对误差（MAE）值及最高的R2和较低的平均绝对百分比误差（MAPE）；SARIMA（1, 1, 1）（2, 1, 1）12可对咸阳市日本脑炎发病率进行较为可靠的预测。结论 SARIMA（1, 1, 1）（2, 1, 1）12可为咸阳市早期识别日本脑炎发病率异常升高（≥0.4/100 000）提供预警；咸阳市日本脑炎的发病率将略有下降，从6月至8月达到顶峰。  

Keywords：日本脑炎;时间序列模型;发病率;预测   

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Updated：2024-04-10

中国老年患者经桡动脉与股动脉介入治疗比较

金辰, 徐奕, 乔树宾, 唐欣然, 吴永健, 颜红兵, 窦克非, 徐波, 杨进刚, 杨跃进

2017, 32(3): 161-170. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.023

Abstract：目的 从院内费用和临床结果两方面对65岁以上老年患者经桡动脉与股动脉路径行经皮冠状动脉介入治疗（percutaneous coronary intervention，PCI）进行比较和评价，为老年患者介入路径选择提供临床和卫生经济学依据。 方法 本研究为回顾性研究，共纳入阜外医院2010年1月1日至2010年12月31日收治的1229例年龄>65岁的PCI病例。其中，经桡动脉路径介入治疗（transradial intervention，TRI）1033例，经股动脉路径介入治疗（transfemoral intervention，TFI）196例。研究使用倾向性评分的逆概率加权法（inverse probability weighting，IPW）对两种路径的患者院内费用和临床结局进行了比较。依据出血学术研究联合会标准，对出血并发症及主要不良心血管事件（包括院内全因死亡、心肌梗死、住院期间再次血运重建及BARC分级≥3）进行了比较。结果 与TFI组相比，TRI组患者平均年龄较低，女性患者所占比例较低，且既往心肌梗死、既往冠状动脉旁路移植术史、既往PCI及既往卒中病史均较少。造影结果提示TRI组患者单支病变比例较高，而开口病变比例则较低。IPW调整后，TRI组患者的院内费用明显低于TFI组，差值为CNY7495（95%CI：4419-10420，P<0.0001），造成住院费用差异的主要原因是TRI组患者PCI术中花费较低。IPW调整后TRI组患者住院时间较短（差值=1.9 d，95%CI：1.1-2.7，P<0.0001），且主要不良心血管事件较少（OR=0.47，95%CI：0.31-0.73，P<0.001）。IPW调整前后，两组患者出血并发症的差异在无统计学意义（P>0.05）。结论 与股动脉路径PCI相比，桡动脉路径可降低65岁以上老年患者院内费用，缩短住院时间，减少主要不良心血管事件的发生。  

Keywords：老年;股动脉路径;桡动脉路径;经皮冠状动脉介入治疗;费用   

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Updated：2024-04-10

开腹肝切除手术中使用持续伤口置管镇痛模式的安全性和有效性

车璐, 卢欣, 裴丽坚

2017, 32(3): 171-176. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.024

Abstract：目的 研究在开腹肝切除手术的患者中使用伤口置管持续浸润镇痛的有效性和安全性。方法 本研究为前瞻非对照队列研究。计划实施开腹部分肝切除手术的患者在充分知情同意后自愿选择进入伤口置管持续浸润镇痛组（CWC），患者自控硬膜外镇痛组（PCEA），患者自控静脉吗啡组（PCIAM），和患者自控静脉舒芬组（PCIAS）。主要研究终点为术后4、12、24、48、72 h静息疼痛和活动疼痛的疼痛评分。次要研究终点为疼痛补救药物的使用，镇痛药物副作用和镇痛管理相关并发症的发生率。结果 在2013年8月至2013年12月期间，共有80例患者满足入组标准。10例患者进入了CWC组，22例进入PCEA组，29例进入PCIAM组，19例进入PCIAS组。在对年龄，性别，身体质量指数，肝切除比例，手术时间，阿姆斯特丹术前焦虑与信息量表评分等因素进行了矫正后，CWC组和PCEA,PCIAM,PCIAS各组间的静息疼痛和活动疼痛评分的差异在术后各个时间点无统计学意义 (P>0.05) 。CWC组在术后24、48和72 h对补救药物的需求和其他各组的差异无统计学意义(P>0.05)。CWC组术后恶心呕吐发生率和术后恢复排气时间与其他各组的差异无统计学意义(P>0.05)。所有研究入组的患者在研究期间未发生与持续伤口置管相关的并发症。结论 CWC与传统临床使用的术后镇痛模式比较，在镇痛效力方面无显著差异。对于开腹肝脏手术患者，CWC是一种安全的术后镇痛模式。  

Keywords：伤口置管持续浸润镇痛;术后疼痛;部分肝切除术   

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Updated：2024-04-10

过氧化物酶体增值物激活受体-γ2基因启动子区C-689T多态性与汉族人群冠心病的相关性

黎简平, 傅永平, 常文秀, 易昌容, 刘丽华, 邢海燕

2017, 32(3): 177-184. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.042

Abstract：目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体-γ2（PPAR-γ2）基因启动子区C-689T多态性与冠心病的相关性。方法 本病例对照研究在中国汉族非糖尿病人群中纳入455例冠心病患者作为病例组，693名健康体检者作为对照组。以问卷的形式采集受试者吸烟、饮酒、体育活动的情况；测量身高、体重、腰围及血压，计算体重指数（BMI）；测定空腹血糖、总胆固醇和甘油三酯水平。采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性检测PPAR-γ2基因启动子区C-689→T突变。分析病例组和对照组间不同基因型的分布差异，并比较两组间的基因型、临床测量指标、实验室检查指标的差异，采用单因素和多因素回归分析基因型对冠心病风险的影响。结果 病例组的C-689T多态性CC，CT和TT基因型频率分别为89.7%, 9.9%和0.4%，对照组分别为 93.1%，6.6%和0.3%，两组的分布差异有显著性 (CC比CT+TT，γ²=6.243，P=0.041)。-689T等位基因携带者（n=95）的总胆固醇水平显著高于非携带者(n=1053，5.12±1.26比4.76±1.22 mmol/L，P=0.001)。男性-689T等位基因携带者(n=51)比男性非携带者(n=656)的腰围更大、体重更重、总胆固醇和甘油三酯水平更高(均P<0.05)。在肥胖者 (BMI≥25 kg/m2)中，-689T等位基因携带者(n=82)与非携带者(n=231)比较，腰围和BMI更大、收缩压和总胆固醇水平更高（P均<0.05）。在校正年龄、性别、腰围、体重、BMI、吸烟、身体活动、血压、空腹血糖、总胆固醇和甘油三酯后，-689T等位基因是冠心病的独立预测因子(OR=1.668，95%CI:1.031-2.705，P=0.037)。结论 -689T等位基因可能与中国汉族人群冠心病高风险性相关。-689T等位基因与冠心病危险因素可能存在相关性。  

Keywords：遗传学;过氧化物酶体增值物激活受体-γ2;冠心病   

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Updated：2024-04-10

Review

餐厨油烟引起肺癌的毒性机制

王春燕, 刘立芳, 刘晓丽, 陈文俊, 何国平

2017, 32(3): 193-197. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.026

Abstract：餐厨油烟是多种毒性物质的混合体，例如醛类、杂环胺、多环芳烃、脂肪气溶胶和颗粒物。研究表明：很多类疾病与餐厨油烟暴露有关，其中以餐厨油烟引起的肺癌报道最多。分子和生化研究表明：餐厨油烟引起肺癌的途径主要有基因损伤、形成活性氧、妨碍相关蛋白功能、甚至直接导致细胞死亡。然而，有关餐厨油烟引起肺癌机制研究的综述性文章较少。阐明餐厨油烟引起肺癌的机理能够给相关肺癌的防治提供新途径，并且能够为餐厨油烟的毒理学研究提供基础。因此本文主要对餐厨油烟引起肺癌的机制进行了总结及讨论。  

Keywords：餐厨油烟;肺癌;毒性机制   

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Updated：2024-04-10

Case Report

Unicentric Castleman’s Disease with Cardiovascular Involvement

2017, 32(3): 198-200. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.030

  

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Updated：2024-04-10

Primary Mucinous Adenocarcinoma of the Thymus: A Case Report and Literature Review

2017, 32(3): 201-203. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.027

  

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Updated：2024-04-10

Clinicopathological and Genetic Study of an Atypical Renal Hemangioblastoma^△

2017, 32(3): 206-210. DOI: 10.24920/J1001-9294.2017.028

  

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Updated：2024-04-10