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论著

鼠源Nectin-like 4糖蛋白在293ET细胞系中的重组表达与纯化

李冬冬, 安泰, 刘枭, 阴彬, 彭小忠, 舒鹏程

2018, 33(1): 1-8. DOI: 10.24920/11805

Abstract：目的 筛选可以高水平表达Nectin-like 4 蛋白的稳定细胞系。方法 首先,将Necls胞外区的cDNA序列插入到修饰载体pAPtag5上碱性磷酸酶（AP）的N端,使其融合表达。其次,在293ET细胞中分泌表达Necls-AP融合蛋白,并通过AP活性和蛋白质免疫印迹等方法检测蛋白表达情况。然后,通过在细胞培养过程中加入N-糖链形成抑制剂以抑制复杂糖链的形成。在纯化的蛋白溶液中加入糖苷酶去除剩余的糖链。最后,使用人鼻病毒3C蛋白酶将融合蛋白上的AP蛋白切除,通过凝胶排阻色谱将该蛋白与目的蛋白分离。最终获得的目的蛋白在280nm波长下检测获得其浓度,通过SDS-PAGE电泳结果检测分析蛋白纯度。结果 通过利用重组载体上AP蛋白标签的颜色反应,我们筛选得到高水平表达Necl-4蛋白的稳转细胞系。在对目的蛋白进行了去糖基化等处理,我们最终可在1L的细胞培养上清中纯化获得4mg可溶、有活性的Necl-4蛋白,且蛋白纯度在95%左右。结论 使用AP蛋白—哺乳动物细胞表达系统,通过对AP蛋白的活性分析,我们快速筛选得到蛋白高表达量的稳转细胞系。在细胞培养中添加糖链抑制剂以及用糖苷酶处理纯化后的蛋白,可以得到了毫克级的去糖基化蛋白Necl-4。.本文中所使用的方法,对于表达、纯化得到糖蛋白用于进一步的结构和功能研究提供了思路。  

Keywords：Nectin-like 免疫球蛋白;膜蛋白;快速筛选法;糖基化;哺乳动物细胞   

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Updated：2024-04-10

Therapy of Rituximab in Idiopathic Membranous Nephropathy with Nephrotic Syndrome: A Systematic Review and Meta-analysis

邹佩美, 李航, 蔡建芳, 陈振杰, 李超, 李学旺

2018, 33(1): 9-19. DOI: 10.24920/21803

Abstract：目的 利妥昔单抗（rituximab, RTX）在表现为肾病综合征（nephrotic syndrome, NS）的特发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy, IMN）中应用的有效性和安全性仍存在争议,尚缺乏大样本研究证实。方法 从PubMed, Embase, Cochrane Library 和 Clinical Trials (2016年12月)检索RTX治疗成人IMN的相关研究,共7项研究（总样本量120人）纳入该系统综述和meta分析。完全缓解和部分缓解为治疗有效,统计累积治疗有效率。结果 该7项研究均为前瞻性观察性队列研究或配对-队列研究,主要来自2个中心,此外其中1项为多中心研究（来自意大利北部4个肾脏中心）。纳入患者为肾活检诊断IMN、肌酐清除率>20ml/min/1.73m2、前期治疗（44人（36.7%）既往接受过免疫抑制治疗）后仍持续尿蛋白>3.5g/d至少6个月,RTX作为一线或二线治疗。研究结果表明,RTX在IMN中的治疗有效,12和24个月时分别有56% (95% CI, 0.47-0.65) 和68% (95% CI, 0.41-0.87)的患者可以达到缓解,完全缓解率为15% (95% CI, 0.09-0.23) 和 20% (95% CI, 0.12-0.32)。治疗过程中,尿蛋白下降明显,伴血清白蛋白升高和胆固醇水平下降,肾功能稳定。24个月内复发率为8%左右。相关不良反应少且轻,主要为输液相关治疗反应。结论 RTX对IMN治疗有效且安全,超过60%的患者可在24个月内达到部分缓解或完全缓解。  

Keywords：rituximab;idiopathic membranous nephropathy;nephrotic syndrome   

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Updated：2024-04-10

延髓发病型及脊髓发病型肌萎缩侧索硬化症脑部磁共振结构特征变化

陈志晔, 刘梦琦, 马林

2018, 33(1): 20-28. DOI: 10.24920/11804

Abstract：目的 采用基于体素的形态测量学技术探索延髓发病型及脊髓发病型肌萎缩侧索硬化症患者脑部磁共振成像结构特征。方法 对65例肌萎缩侧索硬化症患者（15例延髓型,50例脊髓型）及65名健康对照在3.0T磁共振扫描仪上行磁共振脑部结构成像。采用基于体素的形态测量学技术探索脑部灰质体积变化,采用神经形态学模版对体积变化脑区的体积进行计算。结果 与正常对照组比较,肌萎缩侧索硬化症患者在体素水平脑部灰质体积减少的脑区主要分布于右侧中央前回及额中回;延髓发病型肌萎缩侧索硬化症患者脑体积改变主要局限在运动皮层外萎缩（额-颞叶模式）,而脊髓发病型肌萎缩侧索硬化症患者则主要表现为运动皮层萎缩（主要为右侧中央前回）及运动皮层外萎缩（额-颞叶模式及额-颞叶外模式）。两个肌萎缩侧索硬化症亚型间比较,脊髓发病型表现以左侧中央后回灰质体积减少为特征,延髓发病型表现以左侧颞中回灰质体积减少为特征。结论 运动皮层及运动皮层外灰质非对称性萎缩是脊髓发病型肌萎缩侧索硬化症患者脑部结构改变的特征,运动皮层外灰质萎缩是延髓发病型肌萎缩侧索硬化症患者脑部结构改变的特征。脊髓发病型灰质萎缩模式分布较延髓发病型更为广泛。  

Keywords：肌萎缩侧索硬化症;灰质;磁共振成像;中央前回;基于体素的形态测量学   

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Updated：2024-04-10

黄芪甲苷拮抗Aβ1-42所致大鼠氧化应激,神经炎症和认知功能损伤

潘艳芳, 贾晓涛, 宋二飞, 彭小忠

2018, 33(1): 29-37. DOI: 10.24920/11802

Abstract：目的 探讨黄芪甲苷拮抗淀粉样β蛋白（Aβ1-42）所致大鼠学习记忆损害的神经保护作用以及可能的分子机制。方法 成年Wistar雄性大鼠（体重230~250 g）被随机分为对照组、Aβ1-42、黄芪甲苷、（5,25和50 mg/kg·d）黄芪甲苷+Aβ1-42等6组。在脑立体定位仪引导下给大鼠侧脑室注射Aβ1-42。Aβ1-42 注射一周后进行Morris水迷宫实验（水下平台实验,空间探索实验,可见平台实验）,以评估大鼠的空间学习记忆能力。Aβ1-42 注射后第8天开始腹腔注射黄芪甲苷（5,25和50 mg/kg·d）, 连续注射5天。通过行为学软件记录大鼠寻找水下平台的平均逃避潜伏期、逃避距离、以及撤除平台后大鼠在目标象限内的游泳时间和距离百分比。同时测量大鼠的视力和游泳速度,以排除这些因素对记忆能力的影响。行为学实验后,大鼠被处死取出海马,然后测量不同处理组海马组织中的过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和过氧化氢酶(CAT)活性。采用ELISA测量海马组织中白介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) 的水平。结果 水迷宫实验结果显示 ：通过慢性给药,黄芪甲苷能够有效保护大鼠的学习记忆能力免受Aβ1-42损害。同时,黄芪甲苷能够有效拮抗Aβ1-42 所致大鼠海马组织SOD、GSH-px和CAT的活性下降。另外,黄芪甲苷能显著降低Aβ1-42激发的大鼠海马组织中IL-1β和TNF-α的水平。结论 黄芪甲苷能改善阿尔兹海默病模型大鼠的空间记忆能力、降低患者脑组织中的氧化应激和神经炎症反应水平。  

Keywords：淀粉样β蛋白;黄芪甲苷;学习记忆;氧化应激;神经炎症   

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Updated：2024-04-10

三维伪连续动脉自旋标记序列的可重复性：不同功能状态的健康成人在不同标记时间的脑容积灌注成像

刘梦琦, 陈志晔, 马林

2018, 33(1): 38-44. DOI: 10.24920/11803

Abstract：目的 评估三维螺旋自旋回波伪连续动脉自旋标记序列在静息或右手对指运动状态下,在不同标记时间测量脑血流量的可重复性。方法 连续一周在同一时间采用脑部三维伪连续动脉自旋标记及三维T1快速毁损梯度回波序列采集8名健康受试者的脑部图像。分别在静息及右手对指运动状态下施加1.5 s及2.0 s标记时间采集动脉自旋标记数据,计算脑血流量图,并自动提取脑灰质及白质脑血流量。采用组内相关系数及Bland-Altman图评估此技术的可重复性。结果 静息状态下,标记时间1.5 s提取的脑血流灌注图显示灰质（0.84）及白质（0.92）的组内相关系数均低于标记时间2.0 s的数值（灰质,0.88;白质,0.94）。标记时间1.5 s时,右手对指运动状态下的灰质组内相关系数（0.88）大于静息状态下的灰质组内相关系数。第一次扫描时,标记时间1.5 s和2.0 s的灰质及白质的组内相关系数分别为0.71和0.78,第二次扫描时,两者的数值分别为0.83和0.79。结论 在静息或控制状态下和在不同标记时间,三维伪连续动脉自旋标记序列测量健康人全脑血流量具有可重复性。  

Keywords：伪连续动脉自旋标记;磁共振成像;组内相关系数;可重复性   

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Updated：2024-04-10

综述

案例报告

1例因纤维连接蛋白编码基因Y973C突变导致的纤维连接蛋白肾小球病

李超, 文煜冰, 李航, 李明喜, 李学旺, 李雪梅

2018, 33(1): 60-63. DOI: 10.24920/31802

Abstract：纤维连接蛋白肾小球病是一种罕见的常染色体显性遗传的大量纤维连接蛋白沉积的肾小球病。我们诊断了1例纤维连接蛋白肾小球病的29岁女性患者,临床表现为肾病综合征。对纤维连接蛋白的编码基因FN1基因测序显示存在Y973C杂合突变,并且并未发现其父母携带此突变。随访一年后患者肾功能稳定,但肾病范围蛋白尿持续存在。  

Keywords：纤维连接蛋白;肾病综合征;突变   

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Updated：2024-04-10

腹腔镜下肾部分切除术治疗1例肾脏孤立性纤维瘤

陈星, 王建峰, 丁振山, 周晓峰

2018, 33(1): 64-68. DOI: 10.24920/31803

Abstract：患者,女性,27岁,发现右肾肿物两年就诊于我科。我科对该患者行腹腔镜下肾部分切除术。术后免疫组织化学检测发现肿瘤细胞表达CD34、上皮膜抗原、bcl-2和CD99阳性,诊断为孤立性纤维瘤。术后未行辅助治疗。患者目前身体状况良好,术后2年未发现局部复发或转移。我们认为肾孤立性纤维瘤行腹腔镜下肾部分切除术,术后效果较好,是根治性肾切除术之外的一种可选的治疗方式。然而仍然需要对该患者进一步随访,并且对比更多的肾孤立性纤维瘤患者行腹腔镜部分肾切除术与根治性肾切除术之间的肿瘤结局。  

Keywords：孤立性纤维瘤;肾脏;腹腔镜下肾部分切除术   

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Updated：2024-04-10